經(jīng)過基因工程改造的、能生產(chǎn)人胰島素的大腸桿菌是一種特殊的“工程菌”。所用運(yùn)載體（普通質(zhì)粒）結(jié)構(gòu)如圖1，目的基因如圖2。回答下列問題：

（1）該過程中最重要的環(huán)節(jié)是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，方法是選用
X
X
（填“X”或“Y”）限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和目的基因，再用
DNA連接酶
DNA連接酶
處理使之成為重組質(zhì)粒。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體中含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指
RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA片段產(chǎn)熱量大于散熱量
RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA片段產(chǎn)熱量大于散熱量
。
（2）將上述重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，應(yīng)選用
Ca²⁺
Ca²⁺
處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。
（3）將目的基因?qū)胧荏w菌時(shí)，常出現(xiàn)三種情況：未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌、含空載體（普通質(zhì)粒）的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。圖3是含人胰島素基因的重組質(zhì)粒的“工程菌”的篩選示意圖。
圖3中的
B和D
B和D
（用圖中字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。

【答案】X；DNA連接酶；RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA片段產(chǎn)熱量大于散熱量；Ca²⁺；B和D

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：4引用：2難度：0.5

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1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細(xì)胞壁的單細(xì)胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長(zhǎng)的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入鹽藻細(xì)胞中，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增目的基因的前提是需要

，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了

。
（2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達(dá)載體，還需要使用的酶是

（答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達(dá)載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動(dòng)子、

（答出3種）等結(jié)構(gòu)。
（3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細(xì)胞后進(jìn)行了檢測(cè)，相關(guān)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表所示。該檢測(cè)方法依據(jù)的原理是

。據(jù)表分析，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明

。

組別實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果

① ② ③

轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組）離心收集三組細(xì)
胞制備可溶性蛋
白質(zhì)樣品將TI注射到大白
兔體內(nèi)，獲取TI
抗體讓TI抗體和樣品
進(jìn)行混合檢測(cè) 有雜交帶

非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組）無雜交帶

陽性對(duì)照組（C組）有雜交帶

發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

A．科學(xué)家已對(duì)Bt基因的序列信息、表達(dá)產(chǎn)物等有了較為深入的了解

B．篩選Bt基因后可以利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行大量的擴(kuò)增

C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的核心工作是將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中

D．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功首先要進(jìn)行分子水平的檢測(cè)

發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7

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固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL）	0	1	2	5	10
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