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菁優(yōu)網(wǎng)PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），利用大腸桿菌表達該蛋白?；卮鹣铝袉栴}：
（1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的
總RNA
總RNA
，再經(jīng)
逆轉錄
逆轉錄
過程得到cDNA，將其作為PCR反應的模板，并設計一對特異性引物來擴增目的基因。與生物體內(nèi)的DNA聚合酶相比，PCR技術中所用的DNA聚合酶特點是
耐高溫
耐高溫
。
（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，質(zhì)粒DNA含有啟動子，啟動子是
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別并結合的位點。質(zhì)粒DNA分子上有復制原點，可以保證質(zhì)粒在受體細胞中能
準確進行復制
準確進行復制
。
名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
HindⅢ A↓AGCTT EcoRⅠ G↓AATTC
PvitⅡ CAG↓CTG PstⅠ CTGC↓AG
KpnⅠ G↓GTACC BamHⅠ G↓GATCC
注：箭頭表示切割位點
（3）構建基因表達載體需要用到限制酶和DNA連接酶，其中，DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學鍵是
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
。圖1中限制酶的識別序列及切割位點見圖2，為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和
PvitⅡ
PvitⅡ
兩種不同限制酶的識別序列。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（4）轉化前需用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌細胞，使其處于
感受態(tài)
感受態(tài)
，以提高轉化效率。將轉化后的大腸桿菌接種在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。

【答案】總RNA；逆轉錄；耐高溫；RNA聚合酶；準確進行復制；磷酸二酯鍵；EcoRⅠ；PvitⅡ；T4DNA連接酶；Ca2+；感受態(tài)；氨芐青霉素
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/9/5 5:0:8組卷：16引用：2難度：0.6
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  • 1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應器。研究人員利用基因工程技術構建TI基因的表達載體，并將其導入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗?；卮鹣铝袉栴}：
    （1）研究人員利用PCR技術特異性地擴增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構建基因表達載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構建成功的基因表達載體應含有的結構有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結構。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關步驟和實驗結果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實驗結果說明
     
    。
    組別 實驗步驟 實驗結果
    ① ② ③
    轉基因鹽藻（A組） 離心收集三組細
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在
     
    μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應采用
     
    技術。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

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    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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