反硝化細(xì)菌能在無(wú)氧環(huán)境中將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓?+10e-+12H+→…N2O→N2),在處理工業(yè)污水、治理水體富營(yíng)養(yǎng)化中具有重要作用。科研人員想從一污水處理廠的活性污泥中篩選分離出耐高溫(42℃)的反硝化細(xì)菌(目的菌),用于提升溫度較高的工業(yè)污水的脫氮效率,具體流程如圖1所示(BTB培養(yǎng)基初始pH=6.8,BTB是酸堿指示劑,酸性條件下為黃色,中性條件下為綠色,堿性條件下為藍(lán)色):
(1)BTB培養(yǎng)基滅菌后待平板凝固后,應(yīng)倒置放在超凈臺(tái)上,目的是
防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快的揮發(fā)
防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快的揮發(fā)
。在接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,目的是 檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
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(2)將污泥樣品梯度稀釋后,使用 涂布器
涂布器
(填工具)將樣液均勻涂布在BTB培養(yǎng)基上,放在 無(wú)氧、42℃
無(wú)氧、42℃
環(huán)境中培養(yǎng)2~3天后,挑選周?chē)@ 藍(lán)
藍(lán)
色的單菌落在固體培養(yǎng)基上劃線分離,獲得純菌株。
(3)將純菌株接種在液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間,若在培養(yǎng)瓶頂部檢測(cè)到N2O,即可鑒定為目的菌。不能依據(jù)培養(yǎng)液中硝酸鹽的濃度變低來(lái)鑒定目的菌,原因是 其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝,硝酸鹽濃度同樣會(huì)降低
其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝,硝酸鹽濃度同樣會(huì)降低
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(4)為保持純化后的微生物菌種的純凈,需要對(duì)菌種進(jìn)行保藏。臨時(shí)保藏的方法具有 保存時(shí)間短、容易被污染或產(chǎn)生變異
保存時(shí)間短、容易被污染或產(chǎn)生變異
等缺點(diǎn),它比較適合那些使用頻率高的菌種的保藏。
(5)C/N(碳氮含量比)對(duì)反硝化效率有一定的影響??蒲腥藛T測(cè)得不同C/N條件下目的菌對(duì)硝酸鹽的去除率,結(jié)果如圖2所示:
科研人員提出,在利用目的菌株處理工業(yè)污水時(shí),需要適當(dāng)向污水中投放少量淀粉,據(jù)圖分析這樣做的主要目的是 適當(dāng)提高污水中的C/N,從而提高目的菌對(duì)污水中硝酸鹽的去除率
適當(dāng)提高污水中的C/N,從而提高目的菌對(duì)污水中硝酸鹽的去除率
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